illumina定量PCR仪操作流程

2024年05月24日 10:02  点击:[]


1.开机,检查仪器是否正常;

2.把反应板放进仪器系统中,盖上仪器盖子;

3.双击桌面上软件的图标,弹出软件操作界面;

4.选择实验应用类型(定量或基因分型或HRB),检测染料(Sybr染料法或Taqman探针方法,起始模板(DNAOrRNA);

5.如实验应用类型选择定量,再选择相应的定量方法(相对定量或标准曲线定量);

6.点击,完成建立一个新的实验;

7.点击 Plate Layout,弹出样品排布操作界面,进行样品排布,包括标准品(Standard)、样品(unknown)、阴性对照(NTC)等;

8.点击 Thermal Profile,弹出温度时间设置界面,进行反应温度和时间的设置:

9.设置完温度和时间,点击 Start Run 按键,开始反应。

10.反应结束,进行实验数据分析:

8.1 点击 Analyze Data,弹出数据分析操作界面,分别是:原始数据、扩增曲线熔解曲线(SYBR的方法)、结果:

8.2 基线自动设置:点击 Analysis Settings 按钮,分析设置对话框打开,选择 AutoBaseline,点击Apply;如需手动调整基线,在打开的分析设置对话框中,输入基线的起始循环和终止循环数,点击 Apply;

8.3 阈值自动设置:点击 Analysis Settings 按钮,分析设置对话框打开,选择 AutoThreshold,点击Apply;如需手动调整阀值,在打开的分析设置对话框中,输入阀值的具体数字,点击Apply;

8.4结果显示:Eco软件能根据实验设定的类型、基线和阀值自动分析实验数据产生结果图。

◆绝对定量:产生一个标准曲线,根据标准曲线给出未知样品的浓度,同时显示标准曲线斜率、PCR、扩增效率、R2;

◆相对定量:产生不同处理的基因表达高低的柱状图;

◆基因分型:根据基因的类型,产生散点图结果;

◆HRM 实验:产生熔解曲线图,可以通过标准熔解曲线或差异熔解曲线显示基因位点的差异。


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