高效液相SOP
一、开机程序
1.1首先制备新鲜流动相和清洗液
1.2. 打开计算机电源，进入Windows7操作系统
1.3.依次打开SM-FTN样品管理器，QSM四元溶剂管理器电源，待各部件通过自检完成 (Power状态灯右边Run状态灯由红色变为熄灭)
1.4. 双击桌面Empower图标, 输入用户名和密码。
1.5. 打开UPLC控制台(图标在运行样品界面，样品管理器Sample Manager-FTN控制面板右下角)
1.6. QSM泵和SM-FTN样品管理器启动准备操作
1.7. 设定0.2ml/min左右流速100%纯乙腈或甲醇,冲洗检测池5min (若为ELSD检测器，流动相进入检测器前，确保检测器氮气已开，且漂移管温度已升至目标温度)
1.8. 打开TUV(PDA)、FLR、ELSD检测器电源 (若为ELSD检测器, 打开电源前确保氮气钢瓶出口压力已调节至100psi左右)
1.9.待检测器通过自检以后，在控制台界面菜单控制Control >重设RESET 重设检测器通讯
1.10.设置柱温箱温度，以仪器方法初始流动相比例0.2m/min流速平衡系统
1.11. Empower3软件中创建方法组，调用仪器方法监测基线，待系统压力稳定（一般压力波动小于50psi），基线稳定后，开始进样进行 UPLC分析实验
1.12.Empower3软件数据处理
1.13. Empower3软件出结果报告
二.开机细则
2.1.制备新鲜流动相和清洗液
2.1.1 UPLC对流动相的要求
2.1.2有机溶剂要求用色谱纯(最好进口可靠名牌)
2.1.3水或缓冲盐溶液要用质量可靠超纯水(18.2M Q)当天制备
2.2 UPLC对清洗溶液的要求
2.2.1 Wash洗针液（白色标签管路使用）：反相色谱通常使用较高比例的甲醇/水或乙睛/水(如:80/20)，也可根据具体的应用分析选择易将样品冲洗掉的溶液为洗针液
2.2.2 Purger冲洗溶液（橙色标签管路使用）：通常使用含低比例有机相的水溶(如:10%甲醇或乙腈/水溶液)
2.2.3清洗柱塞密封垫Seal Wash（棕色标签管路使用）溶液：
2.2.4通常使用为含5%-10%甲醇的超纯水溶液
*特别提示：以上溶液使用前需注意
·用0.22 μm的可靠滤膜过滤（最好进口滤膜）并脱气2min
·用洁净的玻璃容器盛放，避免污染
·溶剂间的互溶性，若为缓冲盐流动相，使用前需用高比例水相溶液如90%水/甲醇或乙腈溶液过渡冲洗整个系统30倍柱体积
2.2系统启动准备操作
2.2.1 四元溶剂管理器QSM启动准备操作
注意：先选中UPLC控制台左边竖列中四元溶剂管理器
2.2.1.1.灌注柱塞杆清洗液(Prime Seal wash)
点击菜单控制 Control >灌注柱塞杆清洗 Prime Seal wash
时间可设为 3 分钟
*注意：为避免污染，请勿循环使用 Seal wash 清洗液
2.2.1.2溶剂管路灌注（Prime Solvents）
点击菜单控制 Control>灌注溶剂Prime Solvents ，勾选需要灌注的溶剂管路 A、B、C 或 2.2.1.3通常灌注时间可设定为 3 分钟；如果长时间停机，如超过 7 天，可适当延长灌
注时间，如 5 分钟，点击开始 Start
注:灌注时流速已设定为 4ml/min，各溶剂管路依次灌注，如勾选 A、B、C、D 4 个溶剂管路，灌注 3 分钟，则总灌注时间为12 分钟
2.3 样品管理器Sample Manager-FTN启动准备操作
注：选中UPLC控制台左边竖列中样品管理器
2.4灌注清洗溶剂
点击菜单控制 Control>灌注 Prime，勾选清洗溶剂 WashSolvent 灌注洗针溶液,时间默认为 15秒；勾选冲洗溶剂Purge Solvent 灌注样品注射器，默认为 5 个循环，确定
建议：如果更换Purge溶剂，至少进行5次循环灌注；如果样品注射器中有气泡，可适当增加灌注次数如10次，若反复灌注仍不能将气泡排出，可更换为纯甲醇进行灌注至气泡排出，然后将Purge管路放回低比例有机相的Purge溶液中，再做灌注5次
注意：不要使用缓冲盐或酸溶液作为洗针wash或冲洗purge液
2.5.样品制备注意事项
·尽量用流动相溶样
·用0.22um针头式过滤器过滤
·使用UPLC适用的Waters标准样品瓶,
注意:不要使用非Waters指定的样品瓶,以免损坏进样针
三.关机操作
3.1如果实验中使用缓冲盐或酸溶液，需用高比例超纯水如90%水溶液清洗色谱柱及系统，冲洗体积至少为100倍色谱柱体积
3.2待系统中缓冲盐冲洗干净，用适当比例乙腈或甲醇/水溶液如60/40冲洗系统50倍色谱柱体积（可视情况调节）
3.3用纯有机溶剂(乙腈或甲醇)冲洗系统50倍柱体积（可视情况调节），若长时间停机如大于7天，用纯甲醇冲洗整个系统10分钟
3.4缓慢降低流速至零，关闭UPLC控制台和Empower各应用界面，退出Empower工作站。（若长时间停机如大于7天，需将色谱柱从系统中取下用死堵头封好放入色谱柱盒保存）
3.5依次关闭TUV/PDA检测器，QSM溶剂管理器和SM-FTN样品管理器电源
关闭计算机。关闭插座电源。
