生产厂家：美国BD公司
设备型号：Celesta & Fortessa
放置地点：湖南中医药大学科研楼副楼314室
一、开机
1.打开稳压电源，打开电脑。
2.开启仪器，稍等一分钟左右。
3.双击Diva软件
4.检查鞘液桶内鞘液的容量，分带液流车（SSFF）和不带液流车两种情况：
1 ) 如果带液流车，只要注意打开液流车电源开关就可（这点非常重要，否则会导致流动室烧坏），然后检查鞘液过滤器是否有气泡，如果有需请做排气泡操作。
2 ) 如果不带液流车、 保证鞘液在1/2以上（确保鞘液的量足够你的实验包含清洗的量、 运行状态下，鞘液的消耗约18ml/分钟，不然鞘液用完，激光会烧坏流动室），如果不够，请向鞘液桶内添加鞘液，不要超过鞘液桶的指示线。然后检查鞘液过滤器是否有气泡，如果有需做排气泡操作。
5.检查废液桶，确认：
1 ) 清空废液桶；
2 ) 管路畅通，无扭曲。
6.换一管新的ddH2O，HI RUN 1分钟，然后仪器选择STNDBY。
7.准备运行CS＆T程序。
二、CS＆T质控
1.Cytometer下过菜单中选挥CS＆T；
2.如是选中的configuration是第一次做质控，或者使用的是新的LOT No.的CST微球，或者是该批号使用了6个月以上，运行Define baseline；
1 ) Tools>Beads Lots>Import>选择从BD网站上下载的解压缩后的文件（文件名与微球LOT ID一致）
2 ) Lot Id处选择该批号
3 ) 500ul PBS + 3滴混匀的CST微球，Characterize处选择Define Baseline, 仪器面板处选择LO RUN，软件点击Run，开始运行；
4 ) 中间会有两步需点击Continue；
5 ) 第二次点击Continue后自动结束运行，点击View report查看报告。
3.日常质控在Characterize处选择Performance Tracking，500ul PBS + 1滴混匀的CST微球，Lot ID处选择匹配的批号，仪器面板处选择Run，Slow，软件点击Run，开始运行，自动结束运行后点击View report查看报告。
4.关闭CS＆T窗口，回到DIVA界面，出现CST mismatch窗口，点击Use CST Settings。
三、采集数据
1.新建一个New folder（一般在Administrator下）， 在new folder下新建new experiment；
2.再点击New specimen，点开specimen前面的+号，会出现一个Tube，单击Tube前面的箭头，变绿后，激活该实验；
3.在Inspector或者Cytometer窗口里的parameters中选择不需要的接收通道点击Delete去掉；
4.手动补偿方式：
1 ) 在Global Worksheet中画散点图：FSC+SSC，以及各荧光通道两两组合的散点图；
2 ) 上阴性样本，点击acquiredata，调节cytometer窗口parameters对应的FSC/SSC的Voltage电压，使FSC+SSC图中的细胞群完整独立地展示出来；
3 ) Global Worksheet中用画门工具圈中FSC+SSC图中目的细胞，然后在后续荧光通道散点图上点击鼠标右键，show populations中选择该门，使其只展示门中的目的细胞，然后继续调节cytometer窗口parameters中对应荧光通道的Voltage电压，使得阴性细胞群大致在坐标轴的102左右；
4 ) 所有荧光通道的电压调好后点击record记录数据；
5 ) 点击next tube, 上单阳管样本，点击acquire data后，调节cytometer窗口的compensation中的补偿值，根据 "上谁减谁" 的原则调节对应的补偿值，例如单阳管为FITC单染，调节PE对其的补偿，则调节表格中PE-FITC行最后的数值，直至图形阴性群和单阳群横平或者竖直，调节好后点击record记录数据；
6 ) 点击next tube, 依次上其余单阳管，根据第5步方法调节各补偿值，直至所有单阳管调完；
7 ) 点击next tube，上实验样本管。
5.也可设置自动补偿：
1 ) 点击Experiment > Compensation Setup > Create Compensation Controls，会根据之前选择的通道自动生产Compensation Controls和图，按照Compensation Controls的顺序，上阴性样本和单阳管，上阴性对照时调节好电压和P1门的位置，在P1门上右键点击Apply to All Compensation Controls，使P1门应用到当前experiment下所有的Compensation Controls中；
2 ) 上完所有单阳管后，点击 Experiment > Compensation Setup > Calculate Compensation，自动成补偿；
3 ) 补偿生成后，弹出一个窗口，出现三个选项：Link & Save、Apply Only、Cancel，选择Link & Save把当前补偿数据应用到当前experiment的所有数据中并生成一个文件，后期可以直接调出该文件应用其中的补偿数据，Apply Only只应用不保存当前补偿文件，cancel取消，选择Link & Save或Apply Only使补偿生效；
4 ) 在当前experiment下新建一个specimen，点开下面的Tube，将Normal Worksheet切换回Global Worksheet，画图，开始上样，点击next tube直接上后续样本；
6.画门分析后，任意一张图中点击右键show population Hierarchy，可展示门的层级逻辑关系以及更改门的颜色和名字，展示门内的细胞数和比例等；
7.任意一张图中点击右键Creat Statistics View显示统计表格，表格可再右键编辑表头和增减其它统计选项并导出csv格式的exce|表格；
8.Experiment或specimen或tube上右键可export对应FCS原始文件、实验原始文件expriment、实验模板expriment template；
9.Experiment或specimen上右键点击batch analysis可批量导出PDF和Excel表格。
四、关机
1.用2ml BD FACSClean作样品，将样品支撑架置于旁位，液面降一半以后将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行3-5分钟左右。
2.将样品换成4ml蒸馏水作样品，将样品支撑架置于旁位，清洗外管约1分钟。
3.将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟左右。
4.放置盛有1ml（不得多于1ml）蒸馏水的试管于样品支撑架上。
5.备份有用的数据到外置存储器上，便于保存。
6.退出所有应用软件，关闭电脑。
7.关掉Fortessa机。
8.仔细检查鞘液桶四周和样本架上是否有水残留，如果有，请用干布把水擦干。
五、每月维护
1.取下鞘液过滤器，使用去离子水清洗鞘液桶，将FACSClean洗液2L装入鞘液桶，倒空废液桶，样品支撑架上放蒸馏水管，做两遍PRIME。
2.将盛有FACSClean洗液3ml的流式管置于样品支撑架上，以HI RUN运行30分钟，仪器置于STNDBY待机状态，卸掉鞘液桶压力。
3.将鞘液桶和流式管换成FACSRinse洗液，重复步骤2。
4.将鞘液桶和流式管换成蒸馏水，重复步骤2，运行时间30分钟。
5.将鞘液桶装满鞘液，恢复鞘液过滤器，样品支撑架上放蒸馏水管，做2次Prime。
6.放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上，以HI RUN运行5分钟。
