细胞膜片钳记录流程

2024年07月03日 11:43  点击:[]

1. 开机

2. Clampex 选择1440数模转换器

3. 选择数据存储路径

4. 取100mm 培养皿,加3ml的细胞外液

5. 进入细胞房取细胞爬片(如:海马原代培养11-14天)

6. 继续添加15ml的细胞外液,分别加入18μL的TTX(1mM)和PTX(100 mM)

7. 10倍镜下找电极,尽量使电极入水(3-8MΩ)靠近细胞,换40倍镜微调至细胞位置

8. 液接电位补偿(PipetteOffset)

9.  Bath 模式,0mV,电极靠近细胞,观察入液电阻,入液电阻上升0.2-0.3MΩ,表示电极接触到细胞表面,停止下降

10. 改钳制电压-10mV,基线下降

11. 打开气阀,用注射器轻轻一吸,将基线吸平,立刻关闭气阀

12. 改钳制电压-60mV,电阻逐渐上升,待电阻超过100-200MΩ,慢慢打开气阀,逐渐上升至GQ

13. 电极电容补偿(c-fast和c-slow)

14. Cell 模式,用注射器轻轻吸破,或者电刺激zap破膜

15. 膜电容补偿(wholecell)和串联电阻补偿(Rs)

16. Whole-cellpatch,截图记录下漏电流(<-200pA)、细胞电阻、电容、电极电阻(<20MΩ)

17. 打开mEPSCprotocol 记录,记录300s左右


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