1. 开机
2. Clampex 选择1440数模转换器
3. 选择数据存储路径
4. 取100mm 培养皿,加3ml的细胞外液
5. 进入细胞房取细胞爬片(如:海马原代培养11-14天)
6. 继续添加15ml的细胞外液,分别加入18μL的TTX(1mM)和PTX(100 mM)
7. 10倍镜下找电极,尽量使电极入水(3-8MΩ)靠近细胞,换40倍镜微调至细胞位置
8. 液接电位补偿(PipetteOffset)
9. Bath 模式,0mV,电极靠近细胞,观察入液电阻,入液电阻上升0.2-0.3MΩ,表示电极接触到细胞表面,停止下降
10. 改钳制电压-10mV,基线下降
11. 打开气阀,用注射器轻轻一吸,将基线吸平,立刻关闭气阀
12. 改钳制电压-60mV,电阻逐渐上升,待电阻超过100-200MΩ,慢慢打开气阀,逐渐上升至GQ
13. 电极电容补偿(c-fast和c-slow)
14. Cell 模式,用注射器轻轻吸破,或者电刺激zap破膜
15. 膜电容补偿(wholecell)和串联电阻补偿(Rs)
16. Whole-cellpatch,截图记录下漏电流(<-200pA)、细胞电阻、电容、电极电阻(<20MΩ)
17. 打开mEPSCprotocol 记录,记录300s左右